Byzen Pro®（バイゼン プロ）は、プロテインＡ変異体を使用したアフィニティクロマトグラフィー担体であり、従来の酸による抗体溶出の代わりに、温度による抗体溶出を可能にします。
プロテインＡによる全精製工程を中性領域で行うことが可能となり、目的抗体の失活や凝集体のリスクを回避することができます。
| 容量 | 商品コード |
|---|---|
| 5 ml | 0809N05 |
| 25 ml | 0809N25 |
製品の概要
Byzen Proの特徴は、温度変化によって抗体の結合と解離を制御できることにあります｡
野生型プロテインＡでは、強酸による溶出を行うため、潜在的に抗体が凝集体を形成する恐れが指摘されています｡Byzen Proは、任意のpHの緩衝液が使用できるため、酸による抗体の活性低下リスクを回避できます｡
- 中性条件下で溶出可能
- 酸性条件下で精製を行う必要がなく、凝集体や活性低下などのリスクが防止できます
- 温度変化で結合と溶出を制御
- 4 ℃で結合、37 ℃～40 ℃で溶出できます
- 任意の緩衝液で溶出可能
- 中性であれば緩衝液を自由に選択でき、抗体溶出後の緩衝液交換が不要になります
- 優れた抗体吸着特異性
- 野生型プロテインＡと同様の特異性を持ち、優れた不純物淘汰能力を持っています
- ヒト抗体回収率は95％以上
1. 密閉型カラムを使用した精製例
クロマト装置又はポンプに接続して送液を行う場合は、カラム圧力が0.3 MPaを超えないようにご注意ください。
- カラム体積
- 1.0 ml
- カラム高
- 2.5 cm
- 緩衝液Ａ（結合および溶出用）
- 20 mM Phosphate, 150 mM NaCl, pH 8.0
- 流速
- 1.0 ml/min
- 結合温度
- 4 ℃
- 溶出温度
- 40 ℃
- サンプル
- ヒトIgG（1 mg）＋セルライセート(1 ml)
精製
- カラムを5 CVのH2Oで置換し、カラムの手前に5 mlのループをつける
- カラムとループを4 ℃（推奨）に設定した恒温水槽に完全に沈水させ、カラムを緩衝液Ａで平衡化する
- 約5分間待機した後、緩衝液Ａの送液を開始して、サンプルをインジェクトする。
- 不純物が除去された後(この例では、約15 CV（カラム体積）、送液を停止してカラムとループを40 ℃（推奨）の恒温水槽に完全に沈水させる｡
- 約5分間待機した後、緩衝液Ａの送液を開始してIgGを回収する｡
2. オープンカラムを使用した精製例
所定の温度に設定した冷蔵庫／恒温器内にカラムを設置して行います。温度変化の所要時間は使用環境によって異なるため、H2Oを入れたカラムで事前に測定しておくことを推奨します。重力落下による流速が遅い場合は、カラム出口にアスピレータ又はチューブポンプ等を接続して吸引してください。
- 緩衝液Ａ（結合および溶出用）
- 20 mM Phosphate, 150 mM NaCl, pH 8.0
- 流速
- 重力落下
- 結合温度
- 4 ℃
- 溶出温度
- 40 ℃
精製
- 所要量のByzen Proレジンをピペット等でカラムに充填する（抗体濃度が低い場合、レジン高は2 cm以上を推奨）
- 3～4の作業は、4 ℃（推奨）に設定したコールドルーム中で行うか、4 ℃（推奨）に設定した冷蔵庫にカラムを設置して行う
- 5 CVの緩衝液Ａを重力落下させてカラムを平衡化する（緩衝液を事前に4 ℃に冷却しておくと、待機時間を短縮可能）
- カラムの温度が4 ℃であることを確認し、レジンの表面を乱さないように、4 ℃に冷却したサンプルをピペット等でカラムにロードし、重力落下させる（抗体濃度が低い場合、流速は0.2 ml / min程度を推奨）
- レジンの表面を乱さないように、4 ℃に冷却した緩衝液Ａをピペット等でカラムにロードし、重力落下させる。不純物が除去されるまで、このステップを繰り返す
- 7～8の作業は、40 ℃（推奨）に設定した恒温器にカラムを設置して行う
- カラムの温度が40 ℃であることを確認し、レジンの表面を乱さないように、40 ℃の緩衝液Ａをピペット等でカラムにロードし、数分待機した後、重力落下させてIgGを回収する
保存
- カラムを5 CVのH2Oで置換する
- 密閉型カラムの場合は、5 CVの20 ％エタノールでカラムを置換し、そのまま４ ℃で保存する
- オープンカラムの場合は、5 CVの20 ％エタノールでカラムを置換し、レジンをカラムから取り出したうえで、20 ％エタノール中、４ ℃で保存する
仕様
| 樹脂 | ポリビニルアルコール |
|---|---|
| 平均粒径 | 60 μm |
| 耐圧 | 0.3 Mpa、3bar |
| 流速（推奨） | 125～250 cm/h |
| pH（推奨） | pH 6～pH 8 |
| 結合温度（推奨） | 10 ℃以下 |
| 溶出温度（推奨） | 37 ℃ ～40 ℃ |
| 静的最大結合量 | 26～34 mg/ml（ヒトIgG） |
| 保存条件 | 20 ％エタノール、4 ℃ |
精製に適した抗体
- ヒトIgG１、IgG２、IgG４
- ウサギIgG等
